上圖為我們展示了一個(gè)設(shè)計(jì)巧妙的半封閉狀態(tài)小室，該小室采用4 層加熱設(shè)計(jì)：底部、側(cè)壁水浴、頂部和物鏡套環(huán)加熱，4 層加熱維持整個(gè)系統(tǒng)的熱平衡，還為系統(tǒng)提供了濕度保證。這種半密閉式小室還設(shè)計(jì)了CO2 等氣體的進(jìn)入接口和補(bǔ)水口，可以將系統(tǒng)的酸度維持在適宜細(xì)胞生存的范圍。 

對(duì)于短時(shí)間的實(shí)驗(yàn)，如十分鐘左右的延時(shí)攝影，溫度引起的焦平面偏離不是非常明顯，因此這種情況下一般可以忽略Z 軸漂移對(duì)成像的影響。但有時(shí)活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行更長時(shí)間的如半天或24 小時(shí)以上的實(shí)驗(yàn)，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中顯微鏡、相機(jī)、光閘、濾色片轉(zhuǎn)輪、照明、活細(xì)胞小室和電腦等都會(huì)持續(xù)造成熱不穩(wěn)定。因此在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中如果能夠有一個(gè)持續(xù)監(jiān)視焦平面情況并反饋給顯微鏡Z 軸控制裝置的設(shè)備，那么實(shí)驗(yàn)的結(jié)果將會(huì)得到很好的保證。

上圖為我們展示了一個(gè)設(shè)計(jì)巧妙的半封閉狀態(tài)小室，該小室采用4 層加熱設(shè)計(jì)：底部、側(cè)壁水浴、頂部和物鏡套環(huán)加熱，4 層加熱維持整個(gè)系統(tǒng)的熱平衡，還為系統(tǒng)提供了濕度保證。這種半密閉式小室還設(shè)計(jì)了CO2 等氣體的進(jìn)入接口和補(bǔ)水口，可以將系統(tǒng)的酸度維持在適宜細(xì)胞生存的范圍。  對(duì)于短時(shí)間的實(shí)驗(yàn)，如十分鐘左右的延時(shí)攝影，溫度引起的焦平面偏離不是非常明顯，因此這種情況下一般可以忽略Z 軸漂移對(duì)成像的影響。但有時(shí)活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行更長時(shí)間的如半天或24 小時(shí)以上的實(shí)驗(yàn)，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中顯微鏡、相機(jī)、光閘、濾色片轉(zhuǎn)輪、照明、活細(xì)胞小室和電腦等都會(huì)持續(xù)造成熱不穩(wěn)定。因此在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中如果能夠有一個(gè)持續(xù)監(jiān)視焦平面情況并反饋給顯微鏡Z 軸控制裝置的設(shè)備，那么實(shí)驗(yàn)的結(jié)果將會(huì)得到很好的保證。    

紅外反射光監(jiān)視和補(bǔ)償系統(tǒng)是近一兩年開發(fā)的新技術(shù)，是一種帶負(fù)反饋裝置的Z 軸監(jiān)視和補(bǔ)償系統(tǒng)。它通過監(jiān)視經(jīng)過物鏡照射到培養(yǎng)皿的弱紅外激光或LED 光的反射斑形狀或強(qiáng)度來確定標(biāo)本是否離焦。反射平面位于存在折射率差的介質(zhì)交界面處，如空氣和玻璃、玻璃和溶液的交界處。當(dāng)反射斑產(chǎn)生變化時(shí)，監(jiān)控裝置將信息傳遞給Z 軸控制裝置，通過移動(dòng)Z 軸使反射斑恢復(fù)為最初設(shè)定狀態(tài)，而這種狀態(tài)的Z 軸位置和之前的Z 位置相同。 這種方法實(shí)際上監(jiān)視的是物鏡和培養(yǎng)容器底部的距離。長時(shí)間活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)監(jiān)視的基本上是貼壁較好的細(xì)胞，所以這種方法中能夠引入漂移的因素只有容器底部的膨脹和細(xì)胞與容器底部的相對(duì)位移。

 

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