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顯微鏡常見問題解決辦法

顯微鏡常見問題

1：什么是數(shù)值孔徑NA？

A：數(shù)值孔徑是物鏡和聚光鏡的主要技術參數(shù)，是判斷兩者（尤其是對物鏡而言）性能高低的重要標志。數(shù)值孔徑越高，分邊率越高，焦深則越小。

2：是否可以在無限遠光學系統(tǒng)上使用有限遠筒長的物鏡？

A：您可能能夠將物鏡擰上物鏡轉盤，但由于無限遠光學系統(tǒng)光路上的結像透鏡的關系，使用有限遠系統(tǒng)的物鏡不能得到最佳的圖像。

3：是否可以在有限遠筒長的顯微鏡上使用無限遠系統(tǒng)的物鏡？

A：不能。因為像有限遠光學系統(tǒng)不包含可使平行光路聚焦在目鏡光欄面的結透鏡。

4：相差物鏡是否可以用于其他觀察方法?

A：是的，可以。僅需移動相差聚光鏡到“0”位置同時使用柯勒照明。相差物鏡在其后焦平面上有相板，但是大部分光不受這個相板的影響。因此，對圖像質量僅有輕微的影響，對明場圖像依然有用。 Olympus制造的相差物鏡還可應用于熒光觀察。

5：相差物鏡上標記的Ph1、Ph2、Ph3是什么意思？

A：相差物鏡要配合安裝在聚光鏡的環(huán)狀光闌來使用。光闌的直徑要與物鏡的NA值相匹配。Olympus UIS的物鏡，Ph1表示物鏡的NA值不超過0.50；Ph2表示NA值在0.55至1.0之間；Ph3表示NA值大于1.0（油鏡）。長工作距離的物鏡使用專用的相差環(huán)。

6：是否可以為視頻顯微方法選擇高NA值的物鏡觀察微小標本的細節(jié)？

A：是的，可以。當您通過目鏡觀察時眩光可能圖像的細節(jié)變暗，但必要的信息往往包含在其中，那么視頻增強技術可以處理這些信息并且獲得極好的視頻圖像。

7：是否應該購買我所能買得起的最好的物鏡？

A：通常是這樣的，但不總是。如果你所觀察的標本的厚度有幾個微米，平場消色差或平場半復消色差物鏡就很好了，因為比起平場復消色差物鏡有更好的焦深。如果用于彩色照相，平場半復消色差比平場消色差物鏡得到的圖像要好。平場復消色差物鏡在微小細節(jié)上可以得到極好的觀察和照相的效果，但往往要花費比平場半復消色差物鏡高幾倍的價格。

8：如何避免在滴油時損傷40倍的干式物鏡？

A：如果您經常使用100倍的油鏡，您可能想用50倍的油鏡來替換掉40倍的干鏡。50倍的平場消色差油鏡（NA0.90）比標準的40倍平場消色差或消色差干鏡（NA 0.65）得到更加明亮的圖像,更好的清晰度。

9：如何減少在40倍干鏡上沾上香柏油？

A：當您在轉換40倍干鏡和100倍油鏡時，盡量避免40倍的干鏡浸到油上。實驗室經常將這兩款物鏡裝在相對的方向上。

10：為什么有時候40倍的物鏡成象效果比20倍差？

A：當標本的厚度大于標準厚度0.17MM，或在蓋玻片上有其他物質。為了改善成象效果，您可以用帶校正環(huán)干式物鏡，或用40倍和50倍的油鏡來取代40倍的干式物鏡，因為油浸物鏡對蓋玻片厚度變化的敏感性較小。

11：如何在熒光觀察中使用平場校色差物鏡？

A：平場校色差物鏡適用于藍和綠激發(fā)波長，平場校色差物鏡的玻璃張力可以激發(fā)到近紫外。因此，平場校色差物鏡，它的數(shù)值孔徑比平場半復或平場復校色差物鏡低，所以它需要一個調光器。

12：“干式”物鏡（物鏡前透鏡與蓋玻片之間以空氣為介質）的數(shù)值孔徑最大能達到多少？

A：干式物鏡的數(shù)值孔徑可達到0.95，但觀察蓋玻片時需要校正環(huán)。

13：為什么“干式”20倍、40倍和60倍物鏡有校正環(huán)？

A：旋轉校正環(huán)可以使物鏡內的透鏡組的距離，這樣校正由于蓋玻片過厚所帶來的球差。在正置顯微鏡中，校正環(huán)的校正蓋玻片范圍是0.11mm到0.22mm。倒置顯微鏡中，校正范圍0到2mm。

14：為什么20倍的物鏡或更高倍率的物鏡有彈簧或裝配可伸縮的前端透鏡？

A：物鏡一般的工作距離比較短，如果使用不小心物鏡的前端將會碰到載玻片或樣品。在透鏡前安裝彈簧裝置可以防止在使用時碰到樣品。如果安裝不正確，向反方向進行保護而且連續(xù)摩擦。

15："PL" or "NH"在相差物鏡上表示什么意思？

A："PL"代表“正低”，是正相差，是指標本比周圍環(huán)境暗，即明中之暗，適用于折射率比較弱的被檢物體。"NH"代表“負高”，是負相差，是指標本比周圍環(huán)境亮，即暗中之亮。適用于折射率比較弱的被檢物體。

16：為什么需要UV物鏡？

A：UV物鏡的透鏡組采用了新鍍膜工藝設計，這樣可以穿透近紫外波長的光，而普通的物鏡是達不到的，這種物鏡用于紫外熒光激發(fā)工作。新奧林巴斯無限遠校正萬能平場復校色差物鏡和萬能平場半復校色差物鏡在近紫外觀察的性能上有了很大改善。

17：物鏡上為什么帶有"NIC" or "DIC."標記？

A：這些物鏡上的標記特別用在諾瑪斯基或微分干涉顯微鏡。

18：對于"LWD" or "ULWD"對物鏡表示什么意思？

A：這些長工作距離和超長工作距離物鏡，他們的工作距離指物鏡前端聚焦到樣品的距離比其他物鏡的工作距離要長。當需要用倒置顯微鏡觀察培養(yǎng)皿或petri皿，厚冶金金屬樣品，檢查IC電路板和一些焊接接口時，長工作距離和超長工作距離物鏡有一定優(yōu)勢。

19：物鏡上標記的顏色代表什么意思？

A：物鏡上的顏色代表著放大倍率，這樣很容易識別物鏡的放大倍率。紅色標記表示放大倍率為4倍或5倍，黃色代表10倍，綠色代表20倍，蘭色代表 40倍，50倍或60倍。白色代表100倍。奧林巴斯識別相差物鏡用紅色標記靠近物鏡的前透鏡，識別無限遠相差物鏡用綠色表示。

20：為什么物鏡上有“平場”標記？

A：平場物鏡可以使整個成象效果更加平坦。對于視場數(shù)為22的目鏡，許多物鏡都能使成象效果達到平坦。對于新的平場復校色差和平場半復校色差物鏡都能和視場數(shù)為26.5目鏡匹配達到清晰的成象效果。

21：什么是無限遠光學系統(tǒng)物鏡？

A：對于無限遠光學系統(tǒng)物鏡，光線以平行光束射向無限遠。例如物鏡，可以提供許多優(yōu)點，無限遠光學系統(tǒng)包含可使平行光路聚焦在目鏡視場光闌。

22：物鏡上標記的“160“是什么意思？

A：這個標記表示物鏡是有限遠光學系統(tǒng)的，160MM的光學筒長指從物鏡轉盤（物鏡安裝處）到觀察筒頂部（目鏡安裝處）的距離。如果您在物鏡轉盤以上的光路中通過添加附件來增加這個距離，除非這些附件中含有校正透鏡，否則將會產生球差。

23：為什么蓋玻片的標準厚度為0.17MM？

A：0.17MM是蓋玻片的厚度，在物鏡的制造上已經將其厚度的象差計算在內。當物鏡數(shù)值孔徑大于0.45時，假定這個厚度過厚（或完全沒有覆蓋差）這樣最后的成象的效果達不到最佳鏡象效果。

24：為什么暗場顯微鏡需要特殊物鏡？

A：事實表明，在入射光進行觀察時，暗場聚光鏡不讓光束從上到下的通過被檢物體。然而，為了獲得很高的放大倍率，就需要帶虹彩光闌的物鏡來配合暗場聚光鏡使用。對于反射光進行暗場觀察時，需要明場/暗場物鏡進行在暗場下工作。這些物鏡（標記BD/BF/DF）功能是利用被檢物體表面反射或衍射光而形成的明亮圖象。

25：為什么有些物鏡帶虹彩光闌？

A：在使用暗場顯微鏡時為了保持背景足夠黑暗，物鏡的數(shù)值孔徑不應比暗場聚光鏡要高。虹彩光闌可以降低物鏡的數(shù)值孔徑，允許高數(shù)值孔徑的物鏡應用于暗場顯微鏡。虹彩光闌可以使高于數(shù)值孔徑 1.2的物鏡應用于暗場顯微鏡。對于普通明場觀察，虹彩光闌可以處于打開狀態(tài)。

26：為什么有些物鏡是油鏡和水鏡？

A：物鏡的分辨率很大程度上取決于物鏡的NA值，NA值又受透鏡與標本之間介質的折射率的影響。高折射率的介質可以聚集更多的光使圖像更亮、更清晰。當使用空氣作為透鏡和標本之間的介質時，一般低NA值的物鏡就可滿足要求。但是，高NA值的物鏡需要高折射率的介質，那么油可以達到高折射率。當NA 值超過1.0時，在聚光鏡的頂部透鏡載玻片的底部點油可以達到更好的效果。浸油物鏡通常會標記“oil”或“oel”。一些物鏡會應用于活體標本的觀察，就需要水作為介質。這些物鏡通常會標記“WI”。

27：為什么物鏡有校正帽？

A：校正帽：用于C系列的校色差和半復校色差物鏡，觀察玻璃或塑料培養(yǎng)皿時校正球差。物鏡通過調節(jié)校正帽聚焦在皮氏培養(yǎng)皿或厚的載玻片而不影響成象效果。

28：消色差，半復消色差和復消色差的區(qū)別？

A：消色差或平場消色差物鏡至少能校正軸上點的位置色差（紅、藍兩色）、球差（黃綠光）、正弦差以及消除近軸點慧差。但在綠光和白光下顯微照相時能獲得好的鏡象效果（但不是最佳效果）。半復消色差或平場半復消色差物鏡能校正紅、藍兩色光的球差和色差。在成象質量上，遠好于消色差物鏡。在彩色顯微照相時選用半復消色差物鏡，從成象質量和經濟上都是最佳選擇。復消色差、平場復消色差物鏡，不僅能校正紅、綠、藍三色光的色差，而且在同一焦點平面上造象，達到消除“剩余色差”（又稱二級色譜）的效果，同時能校正紅、藍兩色光的球差。它擁有更大的數(shù)值孔徑，這樣分辨率高，象質好，有更高的有效放大率。復校色差物鏡性能很高，適用于高級研究鏡檢和顯微照相。它的景深要比其他物鏡小，所以它比其它種類物鏡要昂貴。

29：什么是工作距離？

A：工作距離又叫物聚，指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離（不包括蓋玻片厚度）。

30：景深和焦深的區(qū)別？

A：根據(jù)透鏡成象原理，焦點只有一個，唯有調焦目標才能在感光片上結成清晰的象，在調焦目標前后會出現(xiàn)一個清晰區(qū)—景深，數(shù)值孔徑越大，景深越小。焦深為焦點深度的簡稱，在使用顯微鏡時，當焦點對準一物體點時，不僅位于該點平面上的各點都能看清楚，而且在此平面上下一定厚度內，也能看的清楚，這個清晰部分的厚度就是焦深，數(shù)值孔徑越大，焦深越小。

常見問題

31：Olympus有UV共聚焦顯微鏡嗎？

A：是的，我們有。Olympus FluoView FV1000 激光掃描共聚焦顯微鏡是一個全自動的系統(tǒng)5個檢測通道，可以配置一個寬譜的激光附件，包括351nm氬離子UV激光器。可為UV激光、可見光激光以及近紅外激光配置3個分立的光纖接口，F(xiàn)V1000可以配置一系列的激光光源直到達到最佳的光強以及激發(fā)光的組合。FV1000的光口是適合UV的，同時唯一的 UVAPO水鏡可校正從350nm到650nm的色差，允許得到通過高質量的UV激發(fā)的標準可見熒光的共聚焦圖像。

32：Olympus是否有4通道共聚焦顯微鏡？

A：是的，我們有。Olympus提供的FluoView FV1000 激光掃描共聚焦顯微鏡是一個全自動的系統(tǒng)，提供5通道和標準的可見激光附件，F(xiàn)luoView FV1000可以配置為紀錄3個共聚焦熒光圖像通道加上一個獨立的透射光照明圖像的通道，允許同時或連續(xù)監(jiān)測綠色、紅色以及遠紅色熒光還包含 Nomarski-DIC圖像。再加上UV激光，F(xiàn)luoView FV1000也可以配置成同時或連續(xù)獲得4個共聚焦熒光圖像通道加上一個透射光獨立通道，允許捕捉藍色、綠色、紅色及遠紅色熒光和 Nomarski-DIC圖像。

33：體視顯微鏡與一臺標準的復合式顯微鏡有什么不同？

A：標準的復合式顯微鏡在觀察筒上是將同一個光路分成左、右兩個同樣的像。體視顯微鏡有兩個光路，或光軸，有一定角度的偏離模擬自然界中兩眼的偏離。就是這個偏離使得在體視顯微鏡下看到普通的活體有深度感和3維立體感。

34：什么是柯勒照明？

A：所有的Olympus顯微鏡都使用柯勒照明，是用燈絲光源給標本提供均勻的照明。聚焦和調中燈絲在物鏡的后焦平面和聚光鏡的前焦平面上在標本的像平面上產生一個最大的散焦的燈絲的像，均勻的照亮整個視野。

35：NA值和放大率如何影響圖像的亮度？

A：在給定的放大倍率下，NA值越大，則圖像越亮。放大倍率越大則圖像越暗。

36：如何辨別一個物鏡的分辨率和清晰度？

A：分辨率指的是一個物鏡可以清晰地分開標本上相近的點或線。能清晰地分開的

點或線的距離越短，則說明分辨率越高。同樣地，物鏡的NA值高，則分辨率也高

。清晰度指的是顯微鏡能達到的物鏡實際可以分開的點或線距離。為了得到最好

的觀察效果有時我們需要折衷分辨率和清晰度。例如，在使用柯勒照明時，通常

會縮小聚光鏡的光欄以得到好的分辨率。

37：什么是顯微鏡的齊焦距離？

A：這些術語指的是選擇距離從物鏡轉盤開口到標本的定焦點（現(xiàn)代顯微鏡這個距

離通常是45mm）。使所有不同倍率的物鏡在轉入光路后只需輕微調焦的一個標準

距離。這就被叫做同焦距。如果在您轉換不同倍率的物鏡時，已聚焦好的標本始

終在視野的中心，那我們稱為在軸。

38：如何獲取價格或得到報價？

A：您可以聯(lián)系當?shù)赜蒓lympus授權的顯微鏡的經銷商以獲取價格。聯(lián)系當?shù)仫@微

鏡經銷商，請點擊這里

39：如何測定顯微鏡的視場直徑的大小？

A：計算視場直徑（單位mm），是用目鏡的視場數(shù)除以物鏡的放大倍率。例如，10

倍的物鏡同時使用視場數(shù)為22的目鏡，那么視場直徑是2.2mm。當時用變倍拉桿時

，物鏡的放大倍率要乘以變倍數(shù)，再被目鏡的視場數(shù)相除，才能得到準確的視場

直徑。

部件

40：聚光鏡作用是什么？

A：顯微鏡的工作NA值是由物鏡的NA加上聚光鏡的NA值再除以2。為了平衡圖像的反差和清晰度，通常將聚光鏡的孔徑光欄開啟至物鏡NA值的 3/4處。阿貝聚光鏡可以適當?shù)匦Ｕ詈颓虿?，消色差消球差聚光鏡（高NA值，用于彩色顯微照相）可以很好地校正色差和球差。有一些聚光鏡頂部的器件可以移出光路，沒有光暈，可適用4倍或2倍的低放大率的物鏡。

41：當物鏡的放大倍率一定時，為什么不能使用更高放大率的目鏡來提高總的放大倍率？

A：為了得到很好的有效放大，您應該盡量減少無效放大或使得圖像看起來大一些但不是很清晰。通常，總的放大倍率不會超過物鏡NA值的750-1000倍。例如，一個40倍，NA是0.65的物鏡，總放大倍率（物鏡與目鏡放大率的乘積）在480-650倍之間。

42：什么是照相目鏡？

A：用于顯微照相，照相目鏡可以從物鏡獲得圖像并投映到相機內的膠片平面上。照相目鏡通常為低放大倍率，以減少圖像在隨后的放大過程中產生的無效放大。

43：通常觀察筒的外徑是多少？

A：通常是25mm，但最近的Olympus 的B-max顯微鏡以及所有Olympus超寬觀察筒是30mm。

44：為什么觀察筒上會有V形槽？

A：觀察筒上的V形槽使用來定位目鏡的，是用來放定位削。這樣在調節(jié)時，目鏡和屈光度調節(jié)環(huán)一起轉動進行定位調節(jié)。

45：目鏡上標記的“C”、“K”、“WF”、“H”代表什么意思?

A：一些物鏡對于側面的色差不能校正，就需要裝配補償目鏡（標記“C”、“K”）來提高成象質量。“WF”指“廣視場”，意思是您可以在一個給定的范圍看到更多的標本。“H”指“高眼點”，意思是如果您戴眼鏡觀察時，眼睛不用緊挨著目鏡同樣可以達到很好的觀察效果。

濾鏡

46：為什么在光路中使用綠色濾波片？